注意事项:

  • Matrigel在-20 ℃时冻结,在-4 ℃下融化;在10 ℃以上将不可逆凝固,因此在铺胶时,96孔板、移液器吸头最好-20 ℃预冷,同时装Matrigel的EP管要置于冰盒中进行操作
  • 铺胶要避免产生气泡
  • 培养时间过长,细胞生长出的血管可能会自动解体
  • 需要一定的细胞密度才能生长出血管
  1. 细胞提前24 h用无血清培养基饥饿(?)。
  2. 提前分装好Matrigel。
  3. 1:1 (v/v)用培养基稀释Matrigel(?)。
  4. 铺胶,50 µL每孔。避免产生气泡。
  5. 可以用针头初步除去气泡。
  6. 先在4 ℃水平静置30 min以除去气泡。
  7. 再于37 ℃下固化30 min。
  8. 铺细胞。HUVEC为40000个,50 µL每孔。
  9. 在细胞生长6–24 h时,找到合适的时间拍照。随机选取5个区域拍照。
  10. 处理数据。