注意事项:
- Matrigel在-20 ℃时冻结,在-4 ℃下融化;在10 ℃以上将不可逆凝固,因此在铺胶时,96孔板、移液器吸头最好-20 ℃预冷,同时装Matrigel的EP管要置于冰盒中进行操作
- 铺胶要避免产生气泡
- 培养时间过长,细胞生长出的血管可能会自动解体
- 需要一定的细胞密度才能生长出血管
- 细胞提前24 h用无血清培养基饥饿(?)。
- 提前分装好Matrigel。
- 1:1 (v/v)用培养基稀释Matrigel(?)。
- 铺胶,50 µL每孔。避免产生气泡。
- 可以用针头初步除去气泡。
- 先在4 ℃水平静置30 min以除去气泡。
- 再于37 ℃下固化30 min。
- 铺细胞。HUVEC为40000个,50 µL每孔。
- 在细胞生长6–24 h时,找到合适的时间拍照。随机选取5个区域拍照。
- 处理数据。